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上海復祥生物ATCC細胞傳代方法

發布時間:2020-02-11瀏覽次數:2457返回列表

  ATCC細胞傳代方法:
  收到細胞后,取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。
  (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。
  (二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:
  1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
  2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱,然后又將培養瓶倒轉大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養培養瓶,細胞隨即脫落下來。
  3. 加入6-8ml完全培養基,吸出,分到新的培養瓶中。一傳二。
  注意:傳代后一半用我們的培養基,一半用你們的,以免細胞不適應而造成生長不好。

  凍存方法: 凍存液:95%完全培養液,5%DMSO
  儲存:液氮儲存



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